| 目的: 探讨中药活性成分蛇床子素是否能增强肿瘤坏死因子对骨肉瘤细胞的凋亡能力并研究其机制。方法: 将骨肉瘤细胞系HOS按对照组,蛇床子素组,TNF-α组及蛇床子素联合TNF-α组进行分组后, MTT法检测HOS细胞的细胞活力,Annexin V/PI染色检测HOS细胞的凋亡,免疫共沉淀联合western blot法检测HOS细胞RIP1蛋白的泛素化,western blot法检测HOS细胞caspase-8的活化和CYLD去泛素化酶的相对表达量。结果: 对照组,蛇床子素组,TNF-α组,蛇床子素+TNF-α组对HOS细胞活力的抑制率分别为0,(8.9±0.6)%,(12.5±0.9)%,(58.6±3.8)%。对照组,蛇床子素组,TNF-α组,蛇床子素+TNF-α组对HOS细胞凋亡的诱导率分别为(1.9±0.3)%,(4.6±0.3)%,(8.3±0.5)%,(39.9±2.5)%。对照组,蛇床子素组,TNF-α组,蛇床子素+TNF-α组与RIP1结合的泛素蛋白的相对表达量分别为1.00±0.07,0.94±0.07,0.81±0.06,0.28±0.02。对照组,蛇床子素组,TNF-α组,蛇床子素+TNF-α组活化的caspase-8蛋白的相对表达量分别为0.01±0.01,0.03±0.01,0.08±0.02,0.46±0.04。对照组,蛇床子素组,TNF-α组,蛇床子素+TNF-α组CYLD蛋白的相对表达量分别为0.28±0.02,0.78±0.05,0.30±0.02,0.81±0.05。CYLD siRNA能显著抑制蛇床子素对TNF-α的协同作用。对照组,蛇床子素+TNF-α组,蛇床子素+TNF-α+CYLD siRNA组RIP1结合的泛素蛋白的相对表达量分别为1.00±0.07,0.26±0.02,0.77±0.05。对照组,蛇床子素+TNF-α组,蛇床子素+TNF-α+CYLD siRNA组对HOS细胞活力的抑制率分别为0,(60.6±3.9)%,(22.1±1.2)%。对照组,蛇床子素+TNF-α组,蛇床子素+TNF-α+CYLD siRNA组对HOS细胞凋亡的诱导率分别为(1.8±0.3)%,(40.6±2.4)%,(13.5±0.9)%。结论: 蛇床子素通过上调去泛素化酶CYLD的表达水平促进TNF-α依赖的RIP1蛋白的去泛素化进而诱导骨肉瘤细胞caspase-8的活化和凋亡的发生。 |
